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Zellbasierte Hochdurchsatzanalysen identifizieren eine zentrale, wachstumsregulierende Rolle von Cofilin-1 im humanen Pankreaskarzinom
Aufgrund der ungünstigen Prognose des humanen duktalen Adenokarzinoms des Pankreas ist es von großer Bedeutung, neue Zielgene zu identifizieren, die Ansatzstellen sowohl für neue Therapien als auch für eine frühere Diagnose bieten können. In der hier vorgestellten Arbeit wurden deshalb insgesamt...
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| 格式: | Dissertation |
| 語言: | German |
| 出版: |
Philipps-Universität Marburg
2013
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| 在線閱讀: | PDF-Volltext |
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| 總結: | Aufgrund der ungünstigen Prognose des humanen duktalen Adenokarzinoms des
Pankreas ist es von großer Bedeutung, neue Zielgene zu identifizieren, die
Ansatzstellen sowohl für neue Therapien als auch für eine frühere Diagnose bieten
können.
In der hier vorgestellten Arbeit wurden deshalb insgesamt 91 potentielle
Kandidatengene funktionell charakterisiert, die in vorangegangenen Hochdurchsatz-
Analysen in Karzinomgeweben eine differentielle Expression aufgewiesen hatten. Für
diese Untersuchung wurde die Methode der „Reverse Transfection“ in unserem Labor
etabliert, um die Experimente in einem parallelisierten Microarray-Verfahren
durchzuführen. Es erfolgten Überexpressions- sowie Repressionsanalysen der
Kandidatengene in verschiedenen transformierten und nicht-transformierten Zelllinien,
in denen die subzelluläre Lokalisation der Genprodukte sowie ihr Einfluss auf zelluläre
Funktionen wie Apoptose, Proliferation oder Differenzierung analysiert wurden.
Die Evaluation dieser funktionellen Daten führte zu einer Auswahl von 10 Genen, die in
den parallelisierten Experimenten reproduzierbare und auffällige Effekte zeigten.
Eines dieser Kandidaten war das Gen Cofilin-1 (CFL1), welches zur ADF/Cofilin-
Familie der aktin-bindenen Proteine gehört. Die „Reverse Transfection“-Experimente
zeigten für CFL1 einen Wachstums-regulierenden Effekt, der im Pankreaskarzinom
bisher unbeschrieben ist. In nachfolgenden, funktionellen Detailanalysen zeigte sich
eine starke Überexpression von CFL1 im Pankreaskarzinom. RNAi-basierte
Inaktivierungen von CFL1 in 4 Zelllinien führten zu einem signifikanten Rückgang des
Zellwachstums, während apoptotische Kaskaden unbeeinflusst blieben. Des Weiteren
konnte mittels Soft-Agar-Analysen eine signifikante Verlangsamung des substratunabhängigen
Wachstums beobachtet werden. Durchfluss-zytometrische Analysen
des Zellzyklus deuten auf eine Verlangsamung der G1/S-Phasen-Transition hin.
In Migrationsanalysen konnte weiterhin eine signifikante Verlangsamung der
Zellbewegungen in „Time Lapse“- und Wundheilungsexperimenten identifiziert werden,
während die gerichtete Migration in Boyden-Kammer-Versuchen unbeeinflusst blieb.
Auf Basis der vorliegenden Literaturdaten stellen dieser Ergebnisse den ersten
Nachweis eines wachstumsregulierenden Effekts von CFL1 im Pankreaskarzinom dar. |
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| DOI: | 10.17192/z2013.0666 |