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Titel:Komplexierung von siRNA zum spezifischen Knock Down von Luciferase in SKOV-3/Luc und 3T3 Zellen
Autor:Merkel, Olivia Monika
Veröffentlicht:2006
URI:https://archiv.ub.uni-marburg.de/ed/2006/0001
URN: urn:nbn:de:hebis:04-ed2006-00015
DOI: https://doi.org/10.17192/ed.2006.0001
DDC: Medizin
Publikationsdatum:2007-01-24
Lizenz:https://rightsstatements.org/vocab/InC-NC/1.0/

Dokument

Schlagwörter:
SKOV-3, PEI-g-PEG, Gentherapie, Poly(ethylene imine), RNS-Interferenz, siGL3, Co-Transfektion, Gene therapy, Polyethylenimin, 3T3, Transfektion, Gentherapie, PEG-PEI, siRNA, Nicht-virale Vektoren, siRNA, Luciferase, RNAi, Transfection, Luciferase

Zusammenfassung:
In der vorliegenden Arbeit wurde ein Assay zur Untersuchung von PEIs als nicht-virale Vektoren für siRNA entwickelt. Hierbei diente PEI 25kDa als Kontrolle. Des Weiteren wurde PEI 5kDa (Low-Molecular-Weight-PEI „LMW-PEI“) mit geringerer Verzweigung, PEI(25k)-g-PEG(550)35 (pegyliert) mit schwächerer Komplexierung und ePEI (ethoxyliert) mit kleinerem pKa-Wert und stärkerer Protonierung im Endosom verwendet. Es wurden die Transfektionsbedingungen und das N/P-Verhältnis der Polyplexe optimiert, diese wurden außerdem physiko-chemisch charakterisiert durch Untersuchung der Komplexierung mittels Agarose-Gel-Elektrophorese und Bestimmung des hydrodynamischen Durchmessers mittels DLS. Es wurde die Effektivität der RNAi nach Transfektion einer konstitutiv Luciferase exprimierenden Zelllinie SKOV-3/Luc bzw. nach eigener Transfektion mit pDNA, die für Luciferase codiert, verglichen und mittels Chemolumineszenz-Assay quantifiziert. Die Spezifität wurde durch Messung unspezifischer Silencing-Effekte mit Kontroll-siRNA abgewandelter Sequenz überprüft, die Komplexe wurden mittels Fluoreszenz-Labelings und Konfokal-Mikroskopie lokalisiert und ihr Zerfall verfolgt.


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