Dokument
| Titel: | Komplexierung von siRNA zum spezifischen Knock Down von Luciferase in SKOV-3/Luc und 3T3 Zellen |
| Autor: | Merkel, Olivia Monika |
| Veröffentlicht: | 2006 |
| URI: | https://archiv.ub.uni-marburg.de/ed/2006/0001 |
| DOI: | https://doi.org/10.17192/ed.2006.0001 |
| URN: | urn:nbn:de:hebis:04-ed2006-00015 |
| DDC: | 610 Medizin |
| Titel (trans.): | Complexation of siRNA for Specific Knock Down of Luciferase in SKOV-3/Luc and 3T3 cells |
| Publikationsdatum: | 2007-01-24 |
| Lizenz: | https://rightsstatements.org/vocab/InC-NC/1.0/ |
| Schlagwörter: |
|---|
| Gene therapy, Transfektion, Co-Transfektion, PEG-PEI, Polyethylenimin, siRNA, Luciferase, siRNA, siGL3, Poly(ethylene imine), Luciferase, SKOV-3, RNAi, Nicht-virale Vektoren, RNS-Interferenz, Gentherapie, Gentherapie, Transfection, 3T3, PEI-g-PEG |
Zusammenfassung:
In der vorliegenden Arbeit wurde ein Assay zur Untersuchung von PEIs als nicht-virale Vektoren für siRNA entwickelt. Hierbei diente PEI 25kDa als Kontrolle. Des Weiteren wurde PEI 5kDa (Low-Molecular-Weight-PEI „LMW-PEI“) mit geringerer Verzweigung, PEI(25k)-g-PEG(550)35 (pegyliert) mit schwächerer Komplexierung und ePEI (ethoxyliert) mit kleinerem pKa-Wert und stärkerer Protonierung im Endosom verwendet.
Es wurden die Transfektionsbedingungen und das N/P-Verhältnis der Polyplexe optimiert, diese wurden außerdem physiko-chemisch charakterisiert durch Untersuchung der Komplexierung mittels Agarose-Gel-Elektrophorese und Bestimmung des hydrodynamischen Durchmessers mittels DLS.
Es wurde die Effektivität der RNAi nach Transfektion einer konstitutiv Luciferase exprimierenden Zelllinie SKOV-3/Luc bzw. nach eigener Transfektion mit pDNA, die für Luciferase codiert, verglichen und mittels Chemolumineszenz-Assay quantifiziert.
Die Spezifität wurde durch Messung unspezifischer Silencing-Effekte mit Kontroll-siRNA abgewandelter Sequenz überprüft, die Komplexe wurden mittels Fluoreszenz-Labelings und Konfokal-Mikroskopie lokalisiert und ihr Zerfall verfolgt.
 | Das Dokument ist im Internet frei zugänglich - Hinweise zu den Nutzungsrechten |