Etablierung eines in vitro-Systems zur Analyse der Differenzierung und Apoptose immaturer testikulärer Keimzellen

Diese Arbeit beschreibt die Etablierung eines in vitro-Systems für primäre männliche Keimzellen, das die Analyse von Differenzierung und Apoptose der Keimzellen ermöglicht. Es wurde Hodengewebe 20 Tage alter Wistar Ratten verwendet. Mittels mechanischer Dissoziation wurden daraus testikuläre Zellen...

Ausführliche Beschreibung

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1. Verfasser: Laible, Leslie
Beteiligte: Konrad, Lutz (Dr.) (BetreuerIn (Doktorarbeit))
Format: Dissertation
Sprache:Deutsch
Veröffentlicht: Philipps-Universität Marburg 2007
Operative Medizin
Schlagworte:
Online Zugang:PDF-Volltext
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contents We established a culture system for immature rat germ cells, which allows the analysis of differentiation and apoptosis of germ cells. For this purpose, we used testicular tissue from 20 day-old Wistar rats. By mechanical dissociation we obtained testicular cells and tissue fragments of well defined size. We examined the differentiation of germ cells in different culture systems: the culture of whole testes, fragments of tubuli seminiferi and of individual cells. In fragments of tubuli seminiferi pachytene spermatocytes differentiated into round spermatids. This development took place within a period of two weeks under the influence of testosterone and follicle stimulating hormone. The stage of differentiation was determined by the expression of stage specific markers, e.g. transition protein 1, transition protein 2 and protamine 1. We analysed the apoptosis of germ cells after stimulation with transforming growth factors-beta (beta-1 and beta-2) and used activation of caspase-3 as a measure of apoptosis. There were indications that TGF-betas induce germ cell apoptosis, but we could not definitely determine this.
spellingShingle We established a culture system for immature rat germ cells, which allows the analysis of differentiation and apoptosis of germ cells. For this purpose, we used testicular tissue from 20 day-old Wistar rats. By mechanical dissociation we obtained testicular cells and tissue fragments of well defined size. We examined the differentiation of germ cells in different culture systems: the culture of whole testes, fragments of tubuli seminiferi and of individual cells. In fragments of tubuli seminiferi pachytene spermatocytes differentiated into round spermatids. This development took place within a period of two weeks under the influence of testosterone and follicle stimulating hormone. The stage of differentiation was determined by the expression of stage specific markers, e.g. transition protein 1, transition protein 2 and protamine 1. We analysed the apoptosis of germ cells after stimulation with transforming growth factors-beta (beta-1 and beta-2) and used activation of caspase-3 as a measure of apoptosis. There were indications that TGF-betas induce germ cell apoptosis, but we could not definitely determine this.
Rat testis
Apoptosis
Primäre Keimzellen
Rattenhoden
Transforming Growth Factor beta
Spermatogenese
Differentiation
Differenzierung
Spermatogenesis
Apoptosis
In-vitro Spermatogenese
Medizin, Gesundheit
Transforming growth factor beta
Germ cells
Etablierung eines in vitro-Systems zur Analyse der Differenzierung und Apoptose immaturer testikulärer Keimzellen
Laible, Leslie
description Diese Arbeit beschreibt die Etablierung eines in vitro-Systems für primäre männliche Keimzellen, das die Analyse von Differenzierung und Apoptose der Keimzellen ermöglicht. Es wurde Hodengewebe 20 Tage alter Wistar Ratten verwendet. Mittels mechanischer Dissoziation wurden daraus testikuläre Zellen und Gewebefragmente definierter Größe gewonnen. Die Differenzierung der Keimzellen wurde in verschiedenen Kultursystemen untersucht: der Organkultur, Kultur von Tubulusfragmenten und Kultur vereinzelter Zellen. Im System der Tubulusfragmente differenzierten sich pachytäne Spermatocyten zu runden Spermatiden. Dieser Entwicklungsschritt vollzog sich unter dem Einfluss von Testosteron und Follikel stimulierendem Hormon innerhalb von zwei Wochen. Der Differenzierungsgrad der Keimzellen wurde anhand der Expression stadienspezifischer Marker, wie Transition Protein 1, Transition Protein 2 und Protamin 1, bestimmt. Die Keimzellapoptose wurde nach Stimulation durch die Transforming Growth Factors-beta (beta-1 und beta-2) anhand der Aktivierung der Caspase-3 gemessen. Es gab Hinweise dafür, dass die TGF-betas die Keimzellapoptose induzieren, jedoch konnte dies nicht definitiv gezeigt werden.
topic Rat testis
Apoptosis
Primäre Keimzellen
Rattenhoden
Transforming Growth Factor beta
Spermatogenese
Differentiation
Differenzierung
Spermatogenesis
Apoptosis
In-vitro Spermatogenese
Medizin, Gesundheit
Transforming growth factor beta
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