Bringezu-Schröder, Kerstin Bringezu-Schröder Kerstin Tegumentprotein Medical sciences Medicine Medizin German 121 application/pdf Publikationsserver der Universitätsbibliothek Marburg Universitätsbibliothek Marburg 2011-08-10 analysis of the nuclear transport of phosphoprotein pp 65 in hcmv infected human fibroblasts Medizin 2007-05-10 https://doi.org/10.17192/z2007.0373 ths Prof. Dr. Kern H. F. Kern, H. F. (Prof. Dr.) Cytomegalie-Virus Anatomie und Zellbiologie 2007-07-12 Kerntransport https://archiv.ub.uni-marburg.de/diss/z2007/0373/cover.png Phosphoprotein pp65 doctoralThesis 2007 opus:1685 Der offene Leserahmen UL83 des humanen Cytomegalievirus kodiert für das Phosphoprotein pp65 (ppUL83). Es gehört zu den Tegumentproteinen und ist in DBs, NIEPs und infektiösen Virionen nachweisbar. Sofort nach Infektion wird es in den Zellkern transportiert, koodiniert durch zwei nukleäre Lokalisationssequenzen. Neusynthetisiertes pp65 ist bereits 4 Stunden nach Infektion nachweisbar. Durch pulse-chase Versuche mit in vitro infizierten primären Fibroblasten (72h p.i.) konnte ein Kerntransport des pp65 auch in der späten Phase der viralen Replikation gezeigt werden. Durch die Experimente konnte jedoch keine genaue Aussage zur Quantität des Kerntransports getroffen werden.Auf Grund dieser Tatsache wurde über einen weiteren Versuchsansatz mit Transfektionsexperimenten versucht die Aufnahme von pp65 in den Zellkern morphologisch darzustellen. Hierfür wurde ein Fusionsprotein aus pp65 und dem grün fluoreszierenden Protein (GFP) genutzt. Dieses Konstrukt befand sich im pcDNA3.1 Expressionsvektor (Fa. Invitrogen) unter Kontrolle des HCMV- Promotors (major- immediate early promotor- enhancer). Untersuchungen mit dem konfokalem Laser Scanning Mikroskop zeigten grün fluoreszierende granuläre Strukturen ab etwa 12 Stunden nach Transfektion. Untersuchungen zum Kerntransport von Phosphoprotein pp65 in HCMV infizierten menschlichen Fibroblasten Phosphoprotein pp65 Tegumentprotein Human cytomegalovirus (HCMV) open reading frame UL83 codes for the phosphoprotein pp65 (ppUL83), an abundant constituent of the virion tegument. It is also detectable in DBs and NIEPs. Immediately after infection pp65 is targeted to cell nucleus. This transport is mediated by two nuclear localization signals. New synthesized pp65 is detectable in the cell nucleus 4 hours after infection. Pulse chase experiments were used to show the nuclear transport of pp65 in the late phase of virion replikation. A statement about the quantity of this nuclear transport was not possible. Therefore transfectionexperiments were used to show the nuclear transport of pp65 in vivo. For this a fusionprotein of pp65 and the green fluorescent protein (GFP) was used, which was localized in the pcDNA3.1 vector. Using the confocal laser scanning microscopy, green fluorescent structures were detectable up to 12 hours after infection. Philipps-Universität Marburg monograph Nuclear transport urn:nbn:de:hebis:04-z2007-03732