Identifizierung und Analyse von Ecdysteroid synthetisierenden Zellen mithilfe eines hämolytischen Plaque Assays
Duckwitz, Hauke
Ecdysteroide spielen eine entscheidende Rolle in der hormonellen Regulation der Entwicklung von Arthropoden. Sie werden von einer spezialisierten Hormondrüse, der so genannten Prothorakaldrüse, sezerniert. Neben diese Drüse ist aber auch eine Vielzahl anderer Gewebe wie z.B. Oozyten, Epidermis oder abdominelle Gewebe beschrieben, die
Ecdysteroide enthalten und ggf. auch sezernieren. Bisher wurde eine Ecdysteroidsekretion eines Gewebes durch den Nachweis der Ecdysteroide in der Inkubationslösung mithilfe von Antikörpern gezeigt.
Wir beschreiben erstmals eine zytologische Methode zum Nachweis Ecdysteroid sezernierender Zellen. Der reverse hämolytische Plaque-Assay ist eine Methode zur Analyse der Hormonsekretion einzelner Zellen und wird in der Endokrinologie vor allem zum Darstellung der Sekretion von Peptidhormonen einzelner Zellen eingesetzt. Nur eine Publikation beschreibt den Einsatz der Methode zum Nachweis von Steroidhormon (Testosteron).
Im Rahmen der Arbeit wurde die Methode des reversen hämolytischen Plaque-Assays nach ausführlicher Auswertung der Literatur im Labor etabliert. Nach Präparation der Ringdrüse von Schmeißfliegen (Calliphora vicina) und Separation der Zellen wurden diese mit Protein-A beladenen Schafserythrozyten gemischt.
In einer Cunningham-Kammer erfolgte die Inkubation mit oder ohne spezifischen Ecdysteroid-Antikörpern. Wir konnten zeigen, dass der Nachweis der Ecdysteroidsekretion einzelner Zellen durch Ausbildung eines Hämolysehofes möglich ist und fotografisch dokumentiert werden kann. Es ergeben sich eine Vielzahl von Anwendungsmöglichkeiten des reversen hämolytische Plaque-Assays zur Untersuchung der Lokalisation und Regulation der Ecdysteroidsekretion in Insekten.
Philipps-Universität Marburg
Medical sciences Medicine
opus:1248
urn:nbn:de:hebis:04-z2005-07065
https://doi.org/10.17192/z2005.0706
65
application/pdf
Identifizierung und Analyse von Ecdysteroid synthetisierenden Zellen mithilfe eines hämolytischen Plaque Assays
Medizin
doctoralThesis
opus:1248
German
monograph
urn:nbn:de:hebis:04-z2005-07065
2005-12-27
Ecdysone
Reverser Hämolytischer Plaque Assay
2005-12-08
Ecdysteroide
Sekretion
ths
Prof. Dr.
Koolman
Jan
Koolman, Jan (Prof. Dr.)
2005
Philipps-Universität Marburg
Publikationsserver der Universitätsbibliothek Marburg
Universitätsbibliothek Marburg
Duckwitz, Hauke
Duckwitz
Hauke
https://archiv.ub.uni-marburg.de/diss/z2005/0706/cover.png
The secretion of ecdysteroids by endocrine cells can be visualized with the help of a reversed haemolytic plaque assay. We show that cells of ring glands isolated from blowfly larvae secrete ecdysteroids in vitro. Under the microsocope the endocrine activity of individual cells can be studied. When effectors of steroidogenesis are added the analysis of endocrine control systems is possible at the cellular level.
Physiologische Chemie
Medical sciences Medicine
Medizin
Ecdysteroide spielen eine entscheidende Rolle in der hormonellen Regulation der Entwicklung von Arthropoden. Sie werden von einer spezialisierten Hormondrüse, der so genannten Prothorakaldrüse, sezerniert. Neben diese Drüse ist aber auch eine Vielzahl anderer Gewebe wie z.B. Oozyten, Epidermis oder abdominelle Gewebe beschrieben, die
Ecdysteroide enthalten und ggf. auch sezernieren. Bisher wurde eine Ecdysteroidsekretion eines Gewebes durch den Nachweis der Ecdysteroide in der Inkubationslösung mithilfe von Antikörpern gezeigt.
Wir beschreiben erstmals eine zytologische Methode zum Nachweis Ecdysteroid sezernierender Zellen. Der reverse hämolytische Plaque-Assay ist eine Methode zur Analyse der Hormonsekretion einzelner Zellen und wird in der Endokrinologie vor allem zum Darstellung der Sekretion von Peptidhormonen einzelner Zellen eingesetzt. Nur eine Publikation beschreibt den Einsatz der Methode zum Nachweis von Steroidhormon (Testosteron).
Im Rahmen der Arbeit wurde die Methode des reversen hämolytischen Plaque-Assays nach ausführlicher Auswertung der Literatur im Labor etabliert. Nach Präparation der Ringdrüse von Schmeißfliegen (Calliphora vicina) und Separation der Zellen wurden diese mit Protein-A beladenen Schafserythrozyten gemischt.
In einer Cunningham-Kammer erfolgte die Inkubation mit oder ohne spezifischen Ecdysteroid-Antikörpern. Wir konnten zeigen, dass der Nachweis der Ecdysteroidsekretion einzelner Zellen durch Ausbildung eines Hämolysehofes möglich ist und fotografisch dokumentiert werden kann. Es ergeben sich eine Vielzahl von Anwendungsmöglichkeiten des reversen hämolytische Plaque-Assays zur Untersuchung der Lokalisation und Regulation der Ecdysteroidsekretion in Insekten.
Ecdysteroid Secreting Cells Indentified by Reverse Haemolytic Plaque Assay
Reverse haemolytic plaque assay
https://doi.org/10.17192/z2005.0706
Steroidogenesis
2011-08-10
Hormone secretion
PRESERVATION_MASTER
VIEW
Image
PRESERVATION_MASTER