Komplexierung von siRNA zum spezifischen Knock Down von Luciferase in SKOV-3/Luc und 3T3 Zellen
Complexation of siRNA for Specific Knock Down of Luciferase in SKOV-3/Luc and 3T3 cells
Olivia Monika
Merkel
RNAi
Transfection
Luciferase
SKOV-3
siRNA
Luciferase
Medical sciences Medicine
Medizin
Transfektion
PEG-PEI
Gentherapie
3T3
Poly(ethylene imine)
siRNA
Nicht-virale Vektoren
PEI-g-PEG
siGL3
Gene therapy
Co-Transfektion
Polyethylenimin
In der vorliegenden Arbeit wurde ein Assay zur Untersuchung von PEIs als nicht-virale Vektoren für siRNA entwickelt. Hierbei diente PEI 25kDa als Kontrolle. Des Weiteren wurde PEI 5kDa (Low-Molecular-Weight-PEI „LMW-PEI“) mit geringerer Verzweigung, PEI(25k)-g-PEG(550)35 (pegyliert) mit schwächerer Komplexierung und ePEI (ethoxyliert) mit kleinerem pKa-Wert und stärkerer Protonierung im Endosom verwendet.
Es wurden die Transfektionsbedingungen und das N/P-Verhältnis der Polyplexe optimiert, diese wurden außerdem physiko-chemisch charakterisiert durch Untersuchung der Komplexierung mittels Agarose-Gel-Elektrophorese und Bestimmung des hydrodynamischen Durchmessers mittels DLS.
Es wurde die Effektivität der RNAi nach Transfektion einer konstitutiv Luciferase exprimierenden Zelllinie SKOV-3/Luc bzw. nach eigener Transfektion mit pDNA, die für Luciferase codiert, verglichen und mittels Chemolumineszenz-Assay quantifiziert.
Die Spezifität wurde durch Messung unspezifischer Silencing-Effekte mit Kontroll-siRNA abgewandelter Sequenz überprüft, die Komplexe wurden mittels Fluoreszenz-Labelings und Konfokal-Mikroskopie lokalisiert und ihr Zerfall verfolgt.
Philipps-Universität Marburg
Marburg
Deutschhausstraße 9, 35037 Marburg
2006
2007-01-24
2007-01-24
Text
masterThesis
urn:nbn:de:hebis:04-ed2006-00015
ger
1
https://archiv.ub.uni-marburg.de/ed/2006/0001/pdf/dpomm.pdf
10.17192/ed.2006.0001
https://archiv.ub.uni-marburg.de/ed/2006/0001
https://rightsstatements.org/vocab/InC-NC/1.0/