Titel: | Untersuchung der Nutzung unterschiedlicher Transkriptionsstartpunkte für mRNA von humanem Kathepsin D unter dem Einfluß von Calcitriol |
Autor: | Wagenknecht, Christian Martin |
Weitere Beteiligte: | Hasilik, Andrej (Prof. Dr.) |
Veröffentlicht: | 2006 |
URI: | https://archiv.ub.uni-marburg.de/diss/z2006/0043 |
DOI: | https://doi.org/10.17192/z2006.0043 |
URN: | urn:nbn:de:hebis:04-z2006-00438 |
DDC: | 610 Medizin |
Titel (trans.): | Examination about the using of different transcription start sites for mRNA of human cathepsin D under the influence of calcitriol |
Publikationsdatum: | 2006-01-30 |
Lizenz: | https://rightsstatements.org/vocab/InC-NC/1.0/ |
Schlagwörter: |
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Calcitriol, Transkriptionsstartpunkte, In Vitro Mutagenesis, Calcitriol, Transcription Initiation Site, Kathepsin D, Kompetitive PCR, In-vitro-Mutagenese, Cathepsin D, Competitive PCR |
Zusammenfassung:
In der vorliegenden Arbeit wurden die Transkriptionsstartstellen für mRNA von humanem Kathepsin D unter dem Einfluß von Calcitriol in U937-Zellen untersucht.
Zu diesem Zweck wurde die Methode der kompetitiven RT-PCR der Fragestellung entsprechend modifiziert. Die Methode der kompetitiven PCR basiert auf der kompetitiven Co-Amplifikation einer spezifischen Target-Sequenz (DNA bzw. revers transkribierte RNA) - also der zu bestimmenden Ziel-DNA-Menge - zusammen mit bekannten Mengen eines internen Standards (Kompetitor, Standard-DNA) im selben Reaktionsgefäß. Die Methode erlaubt den Nachweis kleinster Mengen von DNA bzw. RNA und zugleich deren Quantifizierung. Der dazu benötigte Kompetitor konnte mittels In-vitro-Mutagenese entwickelt werden, bis auf eine Deletion von 30 Bp ist er identisch mit der zu bestimmenden Sequenz.
Es wurde mRNA aus Calcitriol-stimulierten U937-Zellen und aus Kontroll-U937-Zellen isoliert und untersucht.
Mit dieser Arbeit konnte gezeigt werden, daß in beiden Fällen mehrere Transkriptionsstartstellen für Kathepsin D benutzt werden.
Weiterhin konnte eine etwa 8-fache Steigerung der Transkriptionsrate für Kathepsin-D-mRNA unter Calcitriol-Stimulierung nachgewiesen werden.
Eine schwerpunktmäßige Nutzung einer bestimmten Startstelle als Ursache für die gesteigerte Transkriptionsrate, wie dies etwa in Östrogen-stimulierten MCF7-Zellen der Fall ist, konnte nicht gezeigt werden.
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