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Titel: Identifizierung des zentralen Polypeptids des generellen RNA-Polymerase III Transkriptionsfaktors TFIIIC1
Autor: Gruber, Christin
Weitere Beteiligte: Prof. Dr. R. Lührmann
Erscheinungsjahr: 2004
URI: https://archiv.ub.uni-marburg.de/diss/z2004/0420
URN: urn:nbn:de:hebis:04-z2004-04201
DOI: https://doi.org/10.17192/z2004.0420
DDC: Medizin, Gesundheit
Titel(trans.): Identification of the central polypeptide of the general RNA polymerase III transcription factor TFIIIC1

Dokument

Schlagwörter:
Transkriptionsfaktor, TFIIIC1, TFIIIB, Transkription <Genetik>, TFIIIB, Bdp1, Säulenchromatographie, TFNR, Bdp1, RNS-Polymerase III, TFIIIC1, TFNR

Zusammenfassung:
Der Transkriptionsfaktor TFIIIC1 wird für die RNA-Synthese aller humanen Polymerase III-abhängigen Gene unabhängig vom jeweiligen Promotortyp essentiell benötigt. Innerhalb des humanen Pol III Systems ist TFIIIC1 der einzige Transkriptionsfaktor dessen Untereinheiten-Zusammensetzung bisher noch immer ungeklärt blieb. Die Hauptaufgabe der vorliegenden Arbeit lag daher in der chromatographischen Reinigung von TFIIIC1-aktiven Fraktionen. Es sollte eine TFIIIC1-Präparation entstehen, die per MALDI TOF Analyse die Untersuchung der Polypeptid-Zusammensetzung von TFIIIC1 ermöglicht. Der eingesetzte Anionentauscher MiniQ ermöglichte neben der chromatographischen Reinigung auch eine Konzentrierung von TFIIIC1-aktiven Fraktionen, was für die anschließende präparative Gelfiltration essentiell war. Die Größenselektion über Gelfiltration als fünfter und zugleich letzter Schritt innerhalb der TFIIIC1 Reinigungsstrategie ermöglichte die MALDI TOF Analyse von sieben Polypeptiden, die als potentielle Untereinheiten von TFIIIC1 in Frage kamen. Die zur Auswertung dieser analysierten Polypeptide durchgeführten Western Blot Analysen sowie Immunodepletionen führten erstmalig zur Identifizierung des zentralen funktionellen Polypeptids von TFIIIC1. Dabei handelt es sich um das als "Transcription Factor-like Nuclear Regulator" bezeichnete Protein TFNR. Der N-Terminus dieses 250 kDa Proteins ist über 846 Aminosäuren mit dem 150-160 kDa Protein hBdp1 (hB , TFIIIB150) identisch, welches als basaler Pol III Transkriptionsfaktor und Bestandteil der humanen TFIIIB Aktivitäten beschrieben worden ist. Mit der Identifizierung des für die TFIIIC1 Transkriptionsaktivität verantwortlichen Polypeptids ist es zugleich gelungen für die 250 kDa-Variante von hBdp1 (TFNR) eine Funktion als essentiell benötigte Pol III Transkriptionsaktivität zu zeigen. Austauschexperimente zeigten, dass in vitro der N-Terminus von hBdp1 für eine effiziente Pol III Transkriptionsaktivität ausreichend ist.

Summary:
The human transcription factor TFIIIIC1 is a general factor for transcription of all RNA pol III dependent genes. There are no information about the molecular entity of TFIIIC1. The aim of this work was the purification of TFIIIC1 by chromatography in order to analyse the molecular entity of TFIIIC1 by MALDI TOF. The use of anionic exchanger MiniQ resulted in purification and conzentration of TFIIIC1 fractions which was nesessary for further purification of TFIIIC1 by size exclusion chromatography (SEC). SEC resulted in MALDI TOF analysis of seven polypeptides of the most purified TFIIIC1 fraction. Western blot analyses and immundepletion identified the "Transcription Factor-like Nuclear Regulator" (TFNR) as the central polypeptid of TFIIIC1. The 250 kDa protein TFNR shows N-terminal homology to the 150-160 kDa protein hBdp1 (hB'', TFIIIB150). Bdp1 is discribed as an essential pol III transcription factor and the third component of TFIIIB. The identification of the central polypeptid of TFIIIC1 activity proof the function of the 250 kDa form of hBdp1 (TFNR) as essential pol III transcription factor. The N-terminus of hBdp1 is the essential part for transcription activity in vitro.


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